經(jing)常(chang)有(you)同(tong)學(xue)谘(zi)詢(xun),看(kan)到(dao)文(wen)獻(xian)裏(li)麵(mian)很(hen)多(duo)熒(ying)光(guang)蛋(dan)白(bai)的(de)照(zhao)片(pian)非(fei)常(chang)漂(piao)亮(liang),不(bu)知(zhi)道(dao)怎(zen)麼(me)拍(pai)攝(she),上(shang)海(hai)峰(feng)誌(zhi)儀(yi)器(qi)有(you)限(xian)公(gong)司(si)的(de)技(ji)術(shu)工(gong)程(cheng)師(shi)將(jiang)熒(ying)光(guang)蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)的(de)拍(pai)攝(she)方(fang)法(fa)給(gei)大(da)家(jia)說(shuo)一(yi)下(xia),供(gong)大(da)家(jia)參(can)考(kao)。

上圖:紅色熒光蛋白在愈傷上的表達
熒光蛋白表達的拍攝工具:
光源:光源用於激發熒光蛋白發出熒光,如果視野很大,建議購買LUYOR-3415係列GFP激發光源,這款照射麵積大,激發熒光亮度高,拍攝效果非常好。
單反相機:常規的單反相機均可。
拍照濾鏡:根(gen)據(ju)拍(pai)攝(she)的(de)熒(ying)光(guang)蛋(dan)白(bai)種(zhong)類(lei),要(yao)選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)熒(ying)光(guang)蛋(dan)白(bai)拍(pai)照(zhao)濾(lv)鏡(jing),拍(pai)照(zhao)濾(lv)鏡(jing)是(shi)將(jiang)激(ji)發(fa)光(guang)源(yuan)的(de)激(ji)發(fa)光(guang)過(guo)濾(lv)掉(diao),讓(rang)熒(ying)光(guang)蛋(dan)白(bai)的(de)熒(ying)光(guang)通(tong)過(guo),這(zhe)樣(yang)單(dan)反(fan)相(xiang)機(ji)就(jiu)能(neng)呈(cheng)現(xian)精(jing)美(mei)的(de)熒(ying)光(guang)照(zhao)片(pian)。
暗室:因環境明亮光線,影響大熒光的拍攝,拍攝周圍光線越暗,拍攝效果約好,如果沒有暗室,可以選擇夜晚拍攝。
熒光蛋白表達的拍攝技巧:
將單反相機檔位撥到手動檔位(M檔),調整光圈、ISO、和快門速度三個參數到合適值。
將選擇好的熒光蛋白拍照濾鏡安裝到單反相機鏡頭上。
將LUYOR-3415係列GFP激發光源安裝到台式支架上,打開光源開關。
調整合適角度,相機對焦到拍攝目標上,拍攝即可。
說明:
如果是拍攝葉片上的GFP或eGFP的表達,葉片上的葉綠素在450nm激發光照射下會發出強烈的紅色熒光,如果GFP或eGFP的表達量不高的話,會拍攝不到熒光蛋白的表達,這時候建議不用LUV-495A拍照濾鏡,用LUV-520A綠色濾鏡拍攝,LUV-520A綠色濾鏡隻允許綠色波段通過,葉綠素熒光被隔離掉了。




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