進口醫用全自動核酸分子雜交箱概念及原理
概念:hesuanfenzizajiaoshigenjujianjihubuyuanli,yingyongyizhixuliedefenzitanzhenjiancedaicedanlianhesuanpianduanjianjixuliedefenzishengwuxuejishu,muqianguangfanyingyongyufenzishengwuxueshengwuhuaxuebingdujiancejibingzhenduanjiyingongchengdengxuekelingyuzhongyuanli:核酸的Walson-Crick堿基互補配對原則(即A=T,GC)核酸分子雜交儀。上海峰誌儀器有限公司現貨供應美國UVP hb-1000分子雜交箱。
核酸分子雜交技術的分類
核酸分子雜交技術可按雜交環境分為固相雜交和液相雜交兩大類
1固相雜交
固相雜交即先將待測單鏈核酸樣品結合到支持物(常用有硝酸纖維素濾膜尼龍膜化學活化膜等)上,然後與溶液中的已知序列的標記探針進行雜交。固相雜交的特點:固相雜交後,未雜交的遊離片段易除去,從而使膜上留下的雜交分子較易檢測,並可有效避免靶DNA自我複性故固相雜交技術zui為常用。
常用的固相雜交類型有:菌落原位雜交斑點雜交狹縫雜交Southern印跡雜交Northern印跡雜交組織原位雜交和夾心雜交等。
2、液相雜交
液相雜交是指待測核酸和探針都存在於雜交液中,探針於待測核酸在液體環境中按照堿基互補配對形成雜交分子的過程液相雜交是研究zui早的雜交類型,但應用的普遍程度較固相雜交為低。
液相雜交的特點:wuxuzhichiwudaicehesuanfenzibuyonggudingzaizhichiwushangqibiduanshiyouyuzajiaohouguoliangdeweizajiaotanzhencunzaiyurongyezhong,zaiyiyouzajiaojiehewujianceshuipingtiaojianxiajiancewuchajiaogaoguyexiangzajiaozaiguoqujiaoshaoyingyongjinnianlaiyouyuzajiaojiancejishudebuduanjinbu,shangyejianceshijihedekaifadengyexiangzajiaojishudedaolexunsufazhan。
常用的液相雜交類型有:吸附雜交發光液相雜交液相夾心雜交複性速率液相分子雜交。
原位分子雜交實際上是固相雜交中的一種形式,雜交過程中待測DNA處於未經抽提的染色體之上,並在原位置上被變性成單鏈,與探針進行分子雜交。
原位分子雜交與其他雜交技術主要區別在於待測堿基序列位於染色體上其主要特點是可以準確定位目的DNA在染色體上的位置因此在分子遺傳學研究癌基因定位遺傳性疾病臨床診斷方麵具有重要而廣泛應用。

美國UVP HB-1000核酸分子雜交儀標準操作規程
1.目的
保證核酸分子雜交儀的正確和正常使用。
2.範圍
美國進口HB-1000核酸分子雜交儀的使用
3.職責
實驗室內部持有PCR上崗證的人員負責儀器的使用、維護。
4.工作流程
4.1 日常使用
4.1.1 本儀器適用溫度為0-40℃,適用濕度為≤90%。
4.1.2 液晶顯示界麵
正常狀態顯示主界麵,顯示內容對應實時溫度、轉速、定時倒計時時間和提示狀態等信息,當進入參數設定時,則顯示參數設定界麵。
4.1.3 麵板界麵及按鍵操作說明
a)“設定”鍵,按該鍵進入“設定參數”界麵,再通過按“△”或“▽”鍵選擇需要設定的“設定溫度”“旋轉速度”“定時時間”參數,當光標移動到對應參數後,再按“設定”鍵,則進入到對應的參數設定,在參數設定時間完成後,按“設定”鍵,則保存相應的設置。
b)“△”或“▽”鍵,用於調整參數設定項目或在參數設定時調節設定參數值的大小,每按一次上下移動一欄或數值增加較少1。
c)“◁”鍵,用於參數設定時調節參數設定的某一位,自右向左循環,每按一次移動一位。
d)“返回”鍵,參數都設定完畢後,按一下“返回”鍵,返回到主界麵。
e)“消音”鍵,當有提示信號出現時,按“消音”鍵,聲提示消失,提示指示燈仍然保持,同時液晶屏顯示“消音”
f)“啟動”鍵和“停止”鍵,通過操作“啟動”、“停止”鍵,可控製轉架的運行與停止,對應運行指示燈處於“亮”、“滅”狀態。
g)“複位”鍵,如需要重新計時或重新開展一批雜交實驗時,可按“複位”鍵,則電機停止轉動,溫度保持設定溫度,定時時間恢複到初始設定狀態。
4.1.4 使用方法
a)使用前準備,打開箱門,取出轉架,將離心管或雜交瓶插入轉架中,應均衡放置。
b)將裝好試樣的轉架安裝到儀器上,觀察轉架是否固定到位。
c)檢查無誤後,關上箱門,打開電源開關,電源指示燈亮,設定工作溫度、旋轉速度、定時時間等參數。(儀器具有設定參數記憶功能,下次實驗如參數相同時,可不需修改參數)
d)按一下“運行”按鈕,運行指示燈亮,儀器即按照設定的參數運行,箱體內開始加溫,轉軸裝置按設定的速度旋,定時時間開始以0.1min為步長倒計時,定時時間到時,儀器發出聲音提示,並停止加熱和轉動。
e)實驗過程中需停止轉動時,可按一下“停止”鍵,則轉架停止轉動,箱體保持恒溫,調整工作完成後,再按一下“運行”鍵,轉架繼續轉動,定時器隻有在電機正常旋轉時工作。
f)實驗結束,按一下“停止”鍵,打開箱門,取出樣品。
g)如進行下一組樣品的試驗,按一下“複位”按鈕,初始化定時時間,重複上述操作。
4.2 儀器保養
在(zai)核(he)酸(suan)分(fen)子(zi)雜(za)交(jiao)儀(yi)的(de)使(shi)用(yong)過(guo)程(cheng)中(zhong),請(qing)嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)本(ben)操(cao)作(zuo)規(gui)程(cheng)規(gui)定(ding)的(de)運(yun)行(xing)環(huan)境(jing)和(he)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)使(shi)用(yong),每(mei)次(ci)使(shi)用(yong)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)清(qing)理(li)工(gong)作(zuo)室(shi),保(bao)持(chi)儀(yi)器(qi)外(wai)觀(guan)整(zheng)潔(jie),但(dan)需(xu)避(bi)免(mian)使(shi)用(yong)強(qiang)酸(suan)、堿等腐蝕性清潔劑及有機溶劑清潔。
4.3 儀器的校準
溫度檢測方法:用經過驗定合格,測量範圍為0-100℃的玻璃水銀溫度計。
4.3.1設定一個溫度控製值(高於室內溫度5-80℃),調節轉速,運行儀器30min,直到顯示的數值和設定的數值一致。
4.3.2透過門上的玻璃,觀察溫度計上顯示的刻度,獲得箱內的準確溫度。
4.3.3比較這兩個數值,如相差1℃以上,請於廠家聯係。
4.4 故障分析與處理
4.4.1打(da)開(kai)電(dian)源(yuan)開(kai)關(guan),儀(yi)器(qi)電(dian)源(yuan)指(zhi)示(shi)燈(deng)不(bu)亮(liang),應(ying)首(shou)先(xian)檢(jian)查(zha)儀(yi)器(qi)電(dian)源(yuan)連(lian)接(jie)是(shi)否(fou)良(liang)好(hao),如(ru)連(lian)接(jie)良(liang)好(hao),請(qing)切(qie)斷(duan)電(dian)源(yuan)線(xian),並(bing)用(yong)工(gong)具(ju)打(da)開(kai)保(bao)險(xian)絲(si)座(zuo),查(zha)看(kan)保(bao)險(xian)絲(si)是(shi)否(fou)斷(duan)路(lu),如(ru)保(bao)險(xian)絲(si)故(gu)障(zhang),請(qing)及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)保(bao)險(xian)絲(si)。
4.4.2在通電狀態下,當本設備不能正常工作時,請先觀察設定溫度設定是否超過環境溫度+5℃,如未超過請重新設置。
4.4.3如出現超溫提示,先待箱體溫度冷卻至設定溫度以下後,再重新觀察,如果仍然出現, 則一般為設備故障。
4.4.4如排除上述問題,儀器仍不能正常工作,請及時與廠家聯係維修。

美國UVP HB-1000核酸分子雜交儀操作注意事項
分子雜交儀又稱分子雜交爐、分子雜交箱,根據不同實驗的需要可以選擇不同的規格型號。它是現代實驗室采用雜交技術的理想設備,可替代塑料雜交袋和水浴搖床,從而避免雜交袋破損帶來的汙染危險。雜交爐具有微機控溫,爐內空氣循環裝置設計獨特,升溫速度快等特點。
分子雜交儀由箱體、雜交瓶轉架或離心管轉架、雜交管、搖床、隔膜、電腦控製係統等部件組成,如圖所示。不同型號的箱體容納的管子數、微孔版數、載玻片數和平板數也不同。
核酸分子雜交技術根據堿基互補配對原則,在一定條件下用標記的已知DNA或RNA片段(探針)來檢測樣本中是否有待測的核酸序列 [1] 。
生理條件下DNA呈穩定的雙鏈螺旋結構,在體外,當有變性因素存在時(如溫度超過65℃、含胺或極端pH時),DNA分子內部的氫鍵斷裂,解離成兩條單鏈DNA,這種現象稱為變性。在除去變性因素後,單鏈DNA能通過堿基互補再結合成穩定的雙鏈螺旋結構,此過程稱為複性或退火。
在複性過程中,若存有與樣本核酸某部分序列相同或高度同源的外源性單鏈DNA片段或寡核苷酸(一般為17~45個堿基)時,兩者可通過互補堿基形成雜交體,即雙鏈DNA分子,這一過程稱為雜交。用一段已知的DNA片段加入複性的DNA中,若能夠結合成雙鏈分子,說明樣本中含有已知的DNA序列。
核酸分子雜交不僅發生在DNA與DNA之間,也可發生在RNA與RNA、RNA與DNA之間。生成的雜交體分別為 DNA-DNA、 RNA-RNA或 RNA-DNA的雙鏈結構
注意事項:
1. 分子雜交儀需要安裝在有良好接觸的電源插座上。
2. 恒溫室處於高溫狀態下裝取雜交管時,注意不要燙傷。
3. 雜交管在裝入反應液前一定要清洗幹淨,裝入反應液及反應膜後一定要擰緊瓶蓋,以免漏液。
4. zaijinxingtongweisubiaojidezajiaoshiyanshi,bixujianzhazajiaoguandemifengqingkuang,yimianzaochengwuran。yidanfashengwuran,qingjishigaozhiyouguanbumendeshiyongrenyuanhejianxiurenyuan,jinkenengdejianshaobubiyaodeshanghai。
5. 由於分子雜交儀設計結構緊湊,密封性要求高,所以在儀器運行中出現故障需要檢修時,應切斷電源由專業技術人員進行。





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