弧菌(vibrio)是水產品中為常見的致病菌，副溶血性弧菌(vibrioparahaemolyticus)是(shi)我(wo)國(guo)主(zhu)要(yao)水(shui)產(chan)源(yuan)致(zhi)病(bing)菌(jun)，由(you)該(gai)菌(jun)引(yin)起(qi)的(de)食(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)事(shi)件(jian)居(ju)細(xi)菌(jun)性(xing)食(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)事(shi)件(jian)的(de)首(shou)位(wei)，同(tong)時(shi)也(ye)被(bei)視(shi)為(wei)範(fan)圍(wei)內(nei)導(dao)致(zhi)腹(fu)瀉(xie)類(lei)疾(ji)病(bing)的(de)為(wei)主(zhu)要(yao)因(yin)素(su)之(zhi)一(yi)。霍(huo)亂(luan)弧(hu)菌(jun)(vibrio cholerae)是導致人體產生霍亂疾病的主要源頭，流行廣泛且屬於烈性傳染病之一，曾多次引起大麵積的疾病，主要表現為劇烈的嘔吐、腹瀉、失水，嚴重的可導致死亡，如何快速、精準和高效地檢測水產品中致病弧菌具有重要意義。
傳統定量檢測食品中副溶血性弧菌和霍亂弧菌的方法通常需要1周時間，基於dna的 qpcr定量技術雖簡便快捷，但無法區分樣品中死菌和活菌，容易導致假陽性現象。光敏型核酸染料疊氮溴化丙錠(pma)與qpcr技術相結合，可以選擇性地識別水產品中的活菌dna，可用於進行活菌定量檢測。pma前處理包括暗處理和光交聯兩個關鍵步驟，傳統的 pma前處理方法通常在一個密閉的環境進行暗處理，手持600w左右的鈉鎢燈進行光交聯，過程繁瑣，全程人工操作費時耗力；基於藍光led管的光交聯儀器LUYOR-3419PMA光解儀可大大簡化pma前處理過程。
實時熒光定量PCR 即qPCR 技術作為特定核酸片段走量的金標準，是目前應用為廣泛和有效的核酸分子走量手段。考慮到細菌數量和其含有的特定核酸分子(如16S rDNA)裏正比例關係，因此qPCR 技術也被用於細菌定量檢測領域中o 然而在實際的微生物生態體係中，有活細菌也存在著死細菌;死細菌雖然己經死亡，但其DNA 會在較長時間內存在，因此采用qPCR 定量反映的是某種菌總菌的結果。對於微生物體係的解析尤其涉及生態功能的分析， ~t xijundeshumugengjianengfanyinggaizhongjunzaishengtaitixizhongfahuideshijiyingxianghezuoyong，yinciruhepaichusixijundeganraozhunquedinglianghuoxijunbiandeshifenzhongyao，youcicuishenglePMA-qPCR 等活細菌的定量分析技術。
疊氮澳化丙鏈(Propidium Monoazide ， PMA) 是一種對核酸具有高度親和力的光敏染料，由於不能透過完整的細胞膜， PMA 隻能修飾細菌死亡後暴露出來的DNA 分子。用合適濃度的PMA 處理的細菌樣品暴露於強光下時， PMA 所(suo)帶(dai)的(de)光(guang)敏(min)性(xing)疊(die)氨(an)基(ji)團(tuan)轉(zhuan)化(hua)為(wei)高(gao)潔(jie)性(xing)的(de)氮(dan)賓(bin)自(zi)由(you)基(ji)，並(bing)與(yu)結(jie)合(he)位(wei)點(dian)附(fu)近(jin)的(de)任(ren)意(yi)碳(tan)氫(qing)化(hua)合(he)物(wu)反(fan)應(ying)形(xing)成(cheng)穩(wen)定(ding)的(de)共(gong)價(jia)氮(dan)碳(tan)鍵(jian)。這(zhe)樣(yang)使(shi)得(de)死(si)細(xi)菌(jun)的(de)DNA 獲得修飾，導致其DNA 分子的qPCR 擴增被阻斷;而活細菌則不受影響。相關研究表明， PMA 與qPCR 技術結合後可有效的抑製死細菌DNA 的擴增，因此PMA-qPCR 技術是一種能有效用於細菌活細胞定量檢測的分子手段，現在被廣泛應用於致病菌或有害菌活菌的定量檢測等領域中。
PMA 對死細菌DNA 的共價結合效率受到多種因素的影響，主要因素有細菌種類、菌液濃度、PMA 濃度和曝光時間等。PMA 濃度和曝光時間的選擇在於:PMA 濃度過低或曝光時間過短則不能充分結合和修飾死細菌的DNA; 而PMA 濃度高到一定程度則會有不容忽視數量的PMA 分子滲透進活細菌細胞內，長的曝光時間將增強其對活菌DNA 的結合和修飾作用。因此采用PMA-qPCR 對某一研究體係中特定活細菌進行走量檢測時，往往先在固定的純菌濃度下探究佳的PMA 處理濃度和曝光時間，之後用於實際從而達到更高的準確率。
PMA -qPCR ~t菌檢測方法的建立與應用
(1)製備細菌懸液:培養好純菌後，適當稀釋到一定濃度(如OD600=1，即經過稀釋使得在600nm 下的吸光值為1)，取若幹份等體積的菌，其中一半采用加熱和超聲處理結合製備死菌樣品，而另外一半不做處理為活菌樣品;
(2) PMA 處理:在不同的PMA 濃度和曝光時間下處理(1)中的活菌組和死菌組樣品;
(3) qPCR 擴增和數據分析:提取(2) 中經PMA 處理的樣品的基因組DNA ，以此為模板采用該細菌特異性的qPCR 引物進行擴增，得到各組的Ct 值(qPCR 熒光闊值同擴增曲線交點對應的循環數)綜合分析選出佳的PMA 處理條件。低的PMA 濃度和曝光時間為死細菌組Ct 值穩定時(即不隨PMA 濃度和曝光時間的增加而發生顯著的增高，如Ct 值增量不超過1)的處理濃度和時間，高的PMA 濃度和曝光時間為活細菌Ct 穩定時的處理濃度和時間;而佳的PMA 處理條件則在高和低的PMA 濃度和曝光時間之間的實際處理條件中擇優選定，這樣在保證充分抑製死細菌DNA 擴增的同時又不會影響到活細菌DNA 的擴增。
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