iCLIP交聯用哪個波段？多高能量輻照？

iCLIP交聯用哪個波段？多高能量輻照？

分子生物學的iCLIP實驗
，不知道用哪個波段和多少能量輻照
，根據使用過紫外交聯儀的老師反饋
，iCLIP實驗需要用254nm的紫外交聯儀對細胞進行紫外輻照，UV-C輻照能量為150 mJ/cm2，照射一次。

紫外交聯儀在分子生物學的應用：

在紫外線照射下，在分子水平上
，核酸鏈中相鄰的嘧啶可以發生二聚化
，這主要發生在胸腺嘧啶堿基4-6之間。近 100 年來

，研究人員一直利用紫外線的這一特性作為研究基因突變的工具。

紫外交聯儀應用包括：

1.光穩定性驗證

2.突變生物學（生存分析
、紫外線誘導突變
、應激分析）

3.聚合物固化（例如甲基丙烯酸酯樹脂、水凝膠）

4.膜交聯（Northern/Southern 印跡，EMSA）

5.微生物滅活（如細菌、真菌、病毒）

6.雙分子交聯（PAR-CLIP-seq、pBpa、CLIP-seq

、iCLIP-seq、sulfo-SDA
、補骨脂素）

這些應用依賴於可重複的、高強度的紫外線劑量。LUYOR的紫外交聯儀型號是UCL-3200/3500。UCL-3200/3500交聯儀有一個內置高精度紫外福照度計，紫外福照度計可追溯標準進行校準
，以確保無論時間和空間如何都能獲得一致的劑量。

紫外交聯儀UCL-3200/UCL-3500的操作

紫外交聯儀UCL-3200/UCL-3500能夠按照時間或能量 J/cm 2為單位進行設置。因紫外線燈管使用壽命
、環境溫度、供電電壓等因素會造成紫外線強度會發生變化
，建議用戶輻照使用能量設置，盡量不用時間設置。

如果文獻裏使用的是能量單位，用戶可以轉換為 J/cm 2，這是該儀器上用於輸入的測量單位。在下麵表格裏麵提供了各種能量單位如何轉換。

如果文獻裏麵是強度單位

，通常以 µW/cm 2為單位，則該值將伴隨曝光時間。用戶必須將輻照能量值轉換為 mW/cm 2，在下麵表格裏麵提供了各種強度單位如何轉換。此外
，用戶必須將曝光時間轉換為秒（例如 10 分鍾 = 600 秒）。

例如：

研究人員將某種流感病毒暴露於 2000 uW/cm2 10 分鍾。將報告的紫外線劑量轉換為 J/cm 2。

轉換方法 ：

輻照強度 (mW/cm 2 )* 時間(秒) = 輻照劑量 (mJ/cm 2 )

2 mW/cm 2 * 600 秒 = 1200 (mJ/cm 2 )=1.2 (J/cm 2 )交聯輻照如何放置輻照樣品


？

建(jian)議(yi)用(yong)戶(hu)將(jiang)樣(yang)品(pin)放(fang)置(zhi)在(zai)紫(zi)外(wai)交(jiao)聯(lian)儀(yi)輻(fu)照(zhao)腔(qiang)的(de)照(zhao)明(ming)中(zhong)心(xin)位(wei)置(zhi)。放(fang)置(zhi)在(zai)中(zhong)心(xin)的(de)樣(yang)品(pin)能(neng)確(que)保(bao)輻(fu)照(zhao)到(dao)到(dao)設(she)置(zhi)的(de)劑(ji)量(liang)。由(you)於(yu)邊(bian)緣(yuan)效(xiao)應(ying)，放(fang)置(zhi)在(zai)後(hou)麵(mian)和(he)前(qian)麵(mian)位(wei)置(zhi)的(de)樣(yang)本(ben)接(jie)收(shou)的(de)劑(ji)量(liang)將(jiang)少(shao)於(yu)設(she)置(zhi)的(de)劑(ji)量(liang)。